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德国ChromoTek公司GFP trap和booster产品说明!北京乐博生物,优势代理!
lebo / 2015-10-12
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德国ChromoTek公司GFP trap和booster产品说明!北京乐博生物,优势代理!

 

北京乐博生物联系方式:
全国免费咨询热线:4006130504
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传真:010-58850899
邮箱:info@lab-bio.com
网站:
www.lab-bio.com
地址:北京市海淀区清河三街95号同源大厦912室

 

德国ChromoTek公司成立于2008年,致力于细胞生物学和蛋白质组学的研发与研究,公司拥有强大的研发团队,有先进的生物制剂,主要主要使命是花费较少的时间和成本,使客户获得得高质量的实验数据

  德国ChromoTek公司 联合中国专业的生物技术服务提供商-BioTNT,针对中国市场的实际情况,推出全世界最可靠的GFP 相关产品。

 

ChromoTek的产品分类:

一、              Nano-Trap系列;以产品结合物为标准,包含磁珠系列和琼脂糖珠子系列,还有96板系列;抗体结合物包括GFP TrapRFP TrapGST TrapDnmt1-TrapMk2-TrapP53-TrapMdm4/ HdmX-Trap

二、              Booster系列;含GFP booster RFP booster

三、              可用于HCA 实验的Chromobodies(质粒或细胞系形式);

四、              高品质抗体(标签蛋白抗体和普通抗体);

 

产品一:

GFP-Trap  —— 值得信赖的科研工具

Nano-Trap与agarose beads或者magnetic beads结合,在免疫沉淀或蛋白质相互作用的实验中,可高效抓取或纯化GFP或RPF融合蛋白。 (优点:三好三多)

优点一:抗体好---------Nano-Traps采用的抗体是基于alpaca的单域抗体片段(VHHS);具有分子量小(15Kda)、极端稳定(70℃仍保持稳定),高亲和力(高特异性性结合GFP蛋白),无普通抗体轻链与重链污染等一系列优点等优点;GFP抗体可以特异性结合绿色荧光蛋白的衍生物,如eGFP, wtGFP, GFP S65TTagGFP,不与RFP衍生蛋白结合。

优点二:形式好-------抗体结合了agarose beads(琼脂糖珠子)或者magnetic beads(磁珠),在IP实验,COIP ,pulldown,Chip实验中可以直接取代特异性GFP 抗体+proteinA/G 琼脂糖珠子;

优点三:效果好------孵化时间短(只需5-30min),能够更好与结合,从细胞提取物或细胞器中定量分离GFP融合蛋白及结合因子

优点四:实验应用多:被广泛用于免疫沉淀、质谱分析、酶活测定、生物大分子相互作用/亲和力实验、染色质免疫沉淀(ChIP)、蛋白质相互作用分析;

优点五:产品多:有GFP TrapRFP TrapGST TrapDnmt1-TrapMk2-TrapP53-TrapMdm4/ HdmX-Trap NEW!更多Trap 新品,给您提供更多的科研工具!GFPRFPGST Trap作为标签蛋白的特异性纯化方法,Dnmt1-TrapMk2-TrapP53-TrapMdm4/ HdmX-Trap 是用于纯化目的蛋白。

优点六:样品类型多:mammalian cells(哺乳细胞);tissues/ organisms(组织/器官样本);bacteria(细菌);yeast (酵母);plants (植物样本)

 

 

仅需六个步骤,30min 仅需6个步骤30min 实验Chromotek GFP-Trap?_A5大实验应用



 → →收集细胞     细胞裂解      平衡beads      结合蛋白 ,加入裂解的细胞   →    清洗beads   →  洗脱蛋白

 

免疫沉淀

酶活测定

Co-IP

Pull down

ChIP

后期实验

Western blot

酶活测定

沉淀的蛋白质复合物采用SDS-Page 跑胶,western blot鉴定预测作用蛋白Y,或样品利用质谱后续分析。

洗脱的复合物;同时进行GFP和第二标签western blot 实验。

交联反应逆转,DNA纯化,DNA鉴定(如用QPCR 或者chip实验),同普通CHIP   实验

nano trap替代的产品

GFP单克隆/多克隆抗体+Protein A/G琼脂糖微珠

GFP单克隆/多克隆抗体+Protein A/G琼脂糖微珠

GFP单克隆或多克隆抗体+Protein A/G琼脂糖微珠

GST   标签蛋白的亲和层析柱或琼脂糖微珠

GFP单克隆或多克隆抗体+Protein A/G琼脂糖微珠

目的

GFP蛋白样品的富集;或后期实验

可以用beads直接测定酶活

蛋白-蛋白相互作用,一般验证体内的蛋白互作

蛋白-蛋白相互作用,一般验证体外的蛋白互作

蛋白-DNA相互作用

(1)       实验不同,裂解的细胞不同;pulldown 加入的是GFP融合蛋白和第二标签融合蛋白的裂解物;chip实验为细胞固定步骤,染色质断裂步骤;

实验不同,加入的裂解物不同;chip实验加入的为断裂的DNA-蛋白复合物;

 

(2)     GFP-Trap 用于IP 实验Immunoprecipitation)(免疫沉淀)Co-IP 实验(免疫共沉淀) 

 

 

Co-IP 实验Co-Immunoprecipitation)(免疫共沉淀)原理图

 

传统IP

GFP-Trap用于IP

传统Co-IP

GFP-Trap用于Co-IP

 

A

B

C

D

实验原理

抗体与细胞裂解液或上清中相应蛋白结合后,再与蛋白A/GProteinA/G)或二抗偶联的agarose珠子孵育,得到蛋白复合物,洗脱蛋白。

细胞裂解液或上清中的GFP融合蛋白与GFP-Trap孵育,得到蛋白复合物,洗脱蛋白。

细胞非变性条件下裂解,完整胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X,与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。结合的实验原理同A/B

目的

得到纯化的蛋白或进行后期实验

同A

研究蛋白质相互作用

后期实验

洗脱的蛋白采用SDS-Page 跑胶,采用GFP 抗体western blot进行鉴定。

沉淀的蛋白质复合物采用SDS-Page 跑胶,western blot 鉴定,也可利用质谱进行后续分析。

时间

长,超过一天

短,30min

同A

B

步骤

多,超过20个步骤

少,仅需6个步骤

同A

B

特异性

普通抗体特异性不高

羊驼抗体,特异性高

同A

B

使用产品

可选用特异性抗体 GFP单克隆或多克隆抗体+Protein A/G琼脂糖微珠

GFP抗体-琼脂糖珠子,RFP-TrapGST-TrapDnmt1-Trap

同A

B

适用性

通用方法,适合面宽

GFPRFPGSTDnmt1-Trap4个品种的标签蛋白Trap 可选

同A

B

产物

纯度不高

纯度高,对比见下左图

   


产品二:

 Nano-booster是利用Atto公司的优质荧光素共价结合到特异性GFP抗体上;当GFP 融合蛋白信号比较弱的时候,或者荧光蛋白变性后,具有再激活的作用。

 

在研究活细胞中蛋白定位和动力学的过程中是不是会有如下的困惑:

 

1.       固定样品中细胞表达的荧光融合蛋白信号强度在生理表达水平通常很低?

2.       荧光蛋白的耐光性和量子效率达不到超分辨显微镜的要求(如:3D-SIM, STED STORM/ PALM)?

3.       许多细胞生物学方法如Hcl处理的BrdU检测,EdU-Click-It处理或者热变性的荧光原位杂交(FISH)会干扰荧光融合蛋白信号的检测,需要重新激活GFP 信号

 

优点:

优点一:抗体好---------Nano-Boostern 采用的抗体是基于alpaca的单域抗体片段(VHHS);具有分子量小(15Kda)、极端稳定(70℃仍保持稳定),高亲和力(高特异性性结合GFP蛋白),无普通抗体轻链与重链污染等一系列优点等优点;GFP抗体可以特异性结合绿色荧光蛋白的衍生物,如eGFP, wtGFP, GFP S65TTagGFP,不与RFP衍生蛋白结合。

优点二:Atto公司的优质荧光素,具有增强荧光的作用;

优点三:作用效果好:1、作为荧光增强剂使用;

2、对变性荧光蛋白具有再激活作用;

3、不仅能够增强信号,还能够增加荧光蛋白荧光稳定性。

 

优点四:产品多:不仅有GFP booster,还有RFP booster;

 

Nano Booster 产品应用:

1、产品实验方法:免疫荧光(IF),免疫组化(IHC);

2、产品使用材料:细胞系,组织切片;

3、产品应用方向:荧光显微镜,激光共聚焦显微镜,超分辨率显微镜(3D-SIM,PALM, STED,STORM);

实验结果改进示例:

实验应用:

上图:比较 HeLa 细胞系核表达的GFP-融合蛋白,GFP 信号增强(G FP-Booster_Atto488使用前和使用后)由用户确定最适当的稀释倍数。

EdU-Click-iT? 处理会导致GFP 信号的毁坏。 GFP-Booster标记了GFP 融合蛋白,因此有激活和加强荧光信号的作用(稀释比例 1/200, 1 h at RT) (GFP-Booster with EdU-Click-iT? protocol)。 下图:GFP-Dnmt1 融合蛋白,三色荧光检测,同时检测  红色:5’ EdU-Click-iT? Alexa Fluor 594信号;绿色,结合了GFP Booster 信号;蓝色,DAPI 信号(在EdU-Click-iT? 处理后GFP Booster)

备注:Invtrogen新推出的Click-iT? EdU检测也是以检测新合成DNA中掺入的核苷类似物为基础,但该方法所采用的核苷类似物是EdU,而且不是通过抗体检测,而是基于一个click反应 --铜催化的叠氮化物和炔烃之间的共价反应。Click-iT检测避免了BrdU检测所需的苛刻处理条件,可避免DNA变性,维持样本的形态,因而提供了一种更可靠且更简单的方法进行细胞增殖检测。 

DAPI,是一种能够与DNA强力结合的荧光染料,常用与荧光显微镜观测。因为DAPI可以透过完整的细胞膜,它可以用于活细胞和固定细胞的染色。在荧光显微镜观察下,DAPI染剂是利用紫外光波长的光线激发。当DAPI与双股DNA结合时,最大吸收波长为358nm,最大发射波长为461nm,其发散光的波长范围含盖了蓝色至青绿色。 所以不会影响绿色荧光蛋白的观测。

 

 

产品三:Chromobodies;

 

ChromoTek公司的Chromobodies?是一种新的极其微小的细胞内功能抗体。它是基于融合有荧光蛋白(e.g.Tag GFP or Tag RFPfrom Evrogen)的来自羊骆抗体重链的抗原结合域结构(VHH)。和普通抗体不同的是,这些创新的荧光纳米探针可以使活细胞的结构和进程实时分析和可视化。因此,Chromobodies是做研究细胞内研究包含高含量分析(HCA)的一种新的理想试剂。

除了稳定细胞株,你也可以得到Chromobody?质粒,它允许你创建自己的细胞系或瞬时表达Chromobody?。

所有Chromobody?结合域都是经过精心挑选,以不干扰内源性蛋白质的功能,并提供了独特的机会来标记活细胞中天然蛋白。

产品形式:质粒或者细胞系产品。

 

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