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免疫荧光三标实验如何做?如何选择二抗?
转载 / 2012-03-05
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       免疫荧光三标?——蓝色荧光的AMCADylight 405标记二抗

  做免疫荧光实验中,经常要进行免疫荧光的双标记实验,也就是在同一个样本上同时进行两种蛋白的免疫荧光检测。具体的实验时,可以选择不同来源的 一抗,然后再选择分别针对一抗的二抗,同时二抗上标记有不同的荧光团。一般的双标记实验里,都会选择一个绿色的(如FITCCy2Dylight 488等)荧光标记,一个红色的(如RhodaminCy3TRITCTexas RadDylight 539等)的荧光标记。红绿二色的区分度很大,效果也比较理想。那么,如果是三标呢?请看看下面的一个图。

  左侧的一个免疫荧光图片就包括了3种颜色,绿色FITCFITC最大吸收光波长为490495nm,最大发射光波长520530nm,呈现明 亮的黄绿色荧光)和红色罗丹明Rhodamin(最大吸收光波长为570nm,最大发射光波长为595600nm,呈橘红色荧光)的荧光均为荧光团标记 的二抗,而第三种颜色则来自于负染细胞核的蓝色DAPI染料(DAPI 的激发光波长为358 nm ,发射光波长为461 nm ,荧光激发下发蓝光,与细胞核DNA结合)。一般来说,绿色和红色荧光重合后显示的是黄色,而橙色、黄色、红色的光非常接近,因此三标的时候,一般选择蓝 色荧光。就如左图所示。

  实际上,上面的示例并不是完全意义上的免疫荧光三标,因为DAPI只相当于负染。还有一种情况,需要同时在一个样本里通过免疫荧光技术对三种蛋 白进行定位,这就需要选择第三种荧光团,而不是DAPI这样的染料。也即,一个绿色荧光标记的二抗、一个红色荧光标记的二抗,再加一个蓝色荧光标记的二 抗。乐博生物为您提供两种蓝色荧光标记的抗体产品,一种是AMCA蓝色荧光,还有一种是具有更高荧光强度、更好光学稳定性和敏感度的Dylight 405蓝色荧光。

  右图所示即为AMCA蓝色荧光与FITCCy3等荧光的对比图例。AMCA蓝色荧光团的吸收光波长最大为350nm,发射荧光则为450nm。对于荧光显微镜来说,AMCA可以用*灯来激发,用紫外滤板来观察。由于AMCA的信号相对较弱,单标实验中不推荐使用AMCAAMCA和荧光素的荧光波长只有很小的重叠范围,而和发出长波长荧光的荧光基团没有或者只有极少的重叠,因此它最常用于多标记实验中,比如免疫荧光显微镜和流式细胞仪。由于人眼不能很好的检测蓝色荧光,在多标记的实验中,AMCA耦联的二抗应当被用于检测大量的抗原。乐博生物提供EarthOx 多种蓝色AMCA荧光标记的二抗,部分产品如下:

  山羊抗大鼠IgG二抗蓝色AMCA荧光标记 AMCA AffiniPure Goat Anti-Rat IgGH+L

  兔抗山羊IgG二抗蓝色AMCA荧光标记 AMCA AffiniPure Rabbit Anti-Goat IgGH+L

  山羊抗兔IgG二抗蓝色AMCA荧光标记 AMCA AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgGH+L

  山羊抗小鼠IgG二抗蓝色AMCA荧光标记 AMCA AffiniPure Goat Anti-Mouse IgGH+L

  同时,Dylight 405作为Dylight系列的荧光团,具有很多优势,包括更高的荧光强度、更好的光学稳定性和特异性、更高的性价比等。具体见荧光二抗的选择—— Dylight荧光与传统荧光标记的比较。EarthOx的部分Dylight 405荧光抗体产品如下:

  山羊抗大鼠IgG二抗蓝色DyLight 405荧光标记 Dylight 405 AffiniPure Goat Anti-Rat IgGH+L

  兔抗山羊IgG二抗蓝色DyLight 405荧光标记 Dylight 405 AffiniPure Rabbit Anti-Goat IgGH+L

  山羊抗兔IgG二抗蓝色DyLight 405荧光标记 Dylight 405 AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgGH+L

  山羊抗小鼠IgG二抗蓝色DyLight 405荧光标记 Dylight 405 AffiniPure Goat Anti-Mouse IgGH+L

  作为多家国际知名品牌的中国或区域代理,乐博生物能为您提供全系列的Dylight原装进口荧光二抗,包括JacksonKPL的大包装粉末形 式的 Dylight荧光二抗,另外,也提供EarthOx的小包装液体形式Dylight荧光二抗,均具有很高的性价比。针对荧光标记二抗,有FITC、 TRITCRhodaminePECy3/5AMCADylight等多种荧光标记二抗;按照检测物种分,有抗 人、大鼠、小鼠、猪、驴、绵羊、山羊、小鸡、马、兔、仓鼠、狗、牛,以及多种细菌类二抗;另外,还有IgGIgAIgM以及IgGFc)、 IgGab’2等不同类型抗体。如果您对上述产品感兴趣,请致电027-84454412,或13317111952乐博生物科技有限公司垂询相关的 产品信息及完整实验解决方案。


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